安瓿管真空冷冻干燥法

将微生物冷冻，在减压下利用升华作用除去水分，使细胞的生理活动趋于停止，从而长期维持存活状态贵金属预氧时间。

操作步骤如下：

好氧菌冷冻干燥管的制备

1 安瓿管准备

安瓿管材料以中性玻璃为宜贵金属预氧时间。清洗安瓿管时，先用2%盐酸浸泡过夜，自来水冲洗干净后，用蒸馏水浸泡至pH中性，干燥后、贴上标签，标上菌号及时间，加入脱脂棉塞后，121℃下高压灭菌15-20分钟，备用。

2 保护剂的选择和准备

保护剂种类要根据微生物类别选择贵金属预氧时间。配制保护剂时，应注意其浓度及pH值，以及灭菌方法。如血清，可用过滤灭菌；牛奶要先脱脂，用离心方法去除上层油脂，一般在100℃间歇煮沸2-3次，每次10-30分钟，备用。

3 冻干样品的准备

在最适宜的培养条件下将细胞培养至静止期或成熟期，进行纯度检查后（参见科技部自然科技资源平台联合管理办公室文件《微生物菌种纯度检测技术规程》（试行）），与保护剂混合均匀，分装贵金属预氧时间。微生物培养物浓度以细胞或孢子不少于108-1010个/ml为宜（以大肠杆菌为例，为了取得每毫升1010个活细胞菌液2毫升-2.5毫升，只需10毫升琼脂斜面两支）。采用较长的毛细滴管，直接滴入安瓿管底部，注意不要溅污上部管壁，每管分装量约0.1-0.2毫升，若是球形安瓿管，装量为半个球部。若是液体培养的微生物，应离心去除培养基，然后将培养物与保护剂混匀，再分装于安瓿管中。分装安瓿管时间尽量要短，最好在1-2小时内分装完毕并预冻。分装时应注意在无菌条件下操作。

4 预冻

一般预冻2小时以上，温度达到-20℃到-35℃左右贵金属预氧时间。

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5 冷冻干燥

采用冷冻干燥机进行冷冻干燥贵金属预氧时间。

将冷冻后的样品安瓿管置于冷冻干燥机的干燥箱内，开始冷冻干燥，时间一般为8-20小时贵金属预氧时间。

6 真空封口及真空检验

将安瓿管颈部用强火焰拉细，然后采用真空泵抽真空，在真空条件下将安瓿管颈部加热熔封贵金属预氧时间。

熔封后的干燥管可采用高频电火花真空测定仪测定真空度贵金属预氧时间。

7 保藏

安瓿管应低温避光保藏贵金属预氧时间。

8 质量检查

冷冻干燥后抽取若干支安瓿管进行各项指标检查，如存活率、生产能力、形态变异、杂菌污染等贵金属预氧时间。

厌氧菌冷冻干燥管的制备

主要程序与需氧菌操作相同，注意保护剂的选择和准备，保护剂使用前应在100℃的沸水中煮沸15分钟左右，脱气后放入冷水中急冷，除掉保护剂中的溶解氧贵金属预氧时间。

复苏方法

—— 先用70%酒精棉花擦拭安瓿上部贵金属预氧时间，

—— 将安瓿管顶部烧热贵金属预氧时间，

—— 用无菌棉签沾冷水贵金属预氧时间，在顶部擦一圈，顶部出现裂纹，用挫刀或镊子颈部轻叩一下，敲下已开裂的安瓿管的顶端，

—— 用无菌水或培养液溶解菌块，使用无菌吸管移入新鲜培养基上，进行适温培养贵金属预氧时间。

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